Columnas ThermoFisher Syncronis

Especificaciones de las Fases

Caracterización de la Sílice: Tamaño de Partícula y Distribución
Una separación consistente  requiere una base de sílice reproducible para lo que un control estricto de las propiedades físicas de las partículas de sílice es esencial. En cada lote de sílice Syncronis se controla estrictamente el tamaño de la partícula y su distribución, el tamaño del poro y su pureza.
Sólo los lotes que superan estos estrictos controles de calidad son aceptados
Tamaño de Partícula y Distribución
El control estricto de la clasificación de partículas asegura que se consigue una estrecha distribución de tamaños alrededor del tamaño objetivo, consideración muy importante para una eficacia cromatográfica consistente. En cada lote de sílice Syncronis fabricado se comprueba el tamaño y distribución de partículas por nefelometría láser. Dos tamaños de partícula están disponibles: 1.7mm para separaciones UHPLC rápidas y 5mm para análisis HPLC más convencionales.

Tamaño de Poro y Área Superficial
El control estricto del tamaño del poro y del área superficial son elementos clave para asegurar una carga de carbono y unas propiedades retentivas consistentes de la fase cromatográfica. Cada lote de sílice Syncronis pasa un control de tamaño de poro y área superficial mediante porosimetría con Nitrógeno Líquido. Las columnas Syncronis se basan en sílice ultrapura de 100Å y un área superficial de 320 m²/g. Esta mayor superficie en comparación con materiales más convencionales de 200 m²/g permite el análisis de una gama de analitos más hidrofóbicos y asegura una mayor capacidad de carga.
Pureza de la Sílice
La pureza del soporte es de importancia particular al considerar la separación de compuestos polares y básicos. Las sílices de primera generación contienen una gran cantidad de impurezas metálicas, y, si éstas son especialmente electropositivas como el Aluminio, pueden activar los grupos silanoles de la sílice haciéndolos altamente ácidos generando picos con cola en solutos básicos. Las impurezas metálicas pueden también crean complejos con especies con propiedades quelantes con la consiguiente formación de picos asimétricos o con colas o con la completa adsorción del compuesto si las interacciones son los suficientemente fuertes.

Caracterización de las Fases
Las columnas Syncronis se empacan con una gama de fases químicamente ligada y bloqueadas para obtener diferentes selectividades en la separación. Sea cual sea el tipo de fase se requiere un control estricto y comprobaciones rigurosas del proceso de enlace químico para conseguir una separación cromatográfica consistente. En cada lote de Fase Syncronis se determina el porcentaje de carbono y se comprueba sus características cromatográficas antes de seer empacada en la columna.
Carga de Carbono y Recubrimiento Superficial
La retención hidrofóbica de una fase estacionaria depende directamente con la carga de carbono de la sílice. Un control preciso del porcentaje de carbono resulta, pues, crucial para asegurar tiempos de retención consistentes. Las columnas Syncronis están densamente enlazadas y con doble bloqueo para minimizar el número de silanoles residuales libres. En cada lote de fase se determina el porcentaje de carbono mediante un Analizador de Carbono Total.

Tests Cromatográficos
Las características de retención de un material de fase reversa pueden dividirse en interacciones hidrofóbicas que incluyen la medida de la hidrofobicidad del ligando y su densidad, selectividad estérica e interacciones secundarias como la actividad de los silanoles y metales superficiales. El impacto de la interacción entre los silanoles y los analitos depende del pH de la fase móvil: los silanoles de la superficie de la sílice pueden causar enlaces de hidrógeno y los silanoles disociados pueden intercambiar iones con bases protonadas.
Para asegurar separaciones consistentes y predecibles las fases Syncronis se caracterizan ampliamente con unos tests de diagnóstico basaos en los desarrollados por Tanaka que miden la hidrofobicidad, la selectividad estérica y las interacciones secundarias con bases, ácidos y quelantes.

TEST 1A. Interacciones Hidrofóbicas: Retención Hidrofóbica
La primera interacción hidrofóbica que se mide es la Retención Hidrofóbica (HR). El factor de capacidad k de un hidrocarburo neutro como el pentilbenceno indica la hidrofobicidad de la fase estacionaria y, consiguientemente, una medida de la carga de carbono de la sílice.
TEST 1B. Interacciones Hidrofóbicas: Selectividad Hidrofóbica
La segunda medida de interacción hidrofóbica es la Selectividad Hidrofóbica (HS). El factor de selectividad entre el pentilbenceno y el butilbenceno indica una medida del recubrimiento de la fase: estos dos alquilbencenos difieren únicamente por un grupo metilénico y su selectividad depende de la densidad del ligando.
TEST 1C. Interacciones Hidrofóbicas: Enlace de Hidrógeno
La capacidad de crear enlaces de hidrógeno (HBC) de la fase estacionaria se mide determinando el factor de selectividad entre la cafeína y el fenol que indica el número de grupos silanoles libres y el nivel de bloqueo (End Capping). Un valor bajo indica un bajo nivel de silanoles disponibles para crear enlaces de hidrógeno y la robustez del bloqueo.

TEST 2A. Interacciones con Compuestos Básicos y Quelantes: Compuestos Básicos
La presencia de silanoles disociados a pH>7 provoca mediocres formas de pico de compuestos básicos protonados como la amitriptilina. Las interacciones secundarias de intercambio iónico y las causadas por los silanoles pueden causar cambios en los tiempos de retención y picos asimétricos así que el factor de capacidad y el valor de la asimetría del pico de la amitriptilina son indicativas de la prestación general de la columna. Para este compuesto las columnas Syncronis muestran una excelente forma de pico indicando una sílice altamente desactivada.
TEST 2B. Interacciones con Compuestos Básicos y Quelantes: Compuestos Quelantes
Las interacciones superficiales con los metales presentes en la sílice pueden provocar cambios en la selectividad o en la forma de pico de los compuestos quelantes como la quinizarina: cambios en el factor de capacidad y el valor de la asimetría del pico indican interacciones secundarias con las impurezas metálicas de la sílice. La excelente forma de pico de las columnas Syncronis muestran un contenido excepcionalmente bajo de iones metálicos.
TEST 2C. Interacciones con Compuestos Básicos y Quelantes: Intercambio a pH 7.6 (IEC7)
El factor de selectividad entre la bencilamina y el fenol indica la actividad total de los silanoles de la sílice. A pH>7 los silanoles están disociados y se suman a los sitios de intercambio iónico para
modificar la retención de la bencilamina.

TEST 3A. Interacción con Compuestos Ácidos: Actividad frente a Ácidos
La inercia de la fase estacionaria frente los compuestos ácidos resulta muy importante puesto que estas especies pueden resultar adsorbidas en los materiales de fase reversa. El factor de capacidad y el valor de la asimetría del pico del ácido clorocinnámico indican la actividad de la fase frente a compuestos ácidos. Para este compuesto las columnas Syncronis muestran una excelente forma de pico indicando un alto grado de inercia frente a compuestos ácidos.
TEST 3B. Interacción con Compuestos Ácidos: Capacidad de Intercambio a pH 2.7 (IEC2)
Tanaka ha mostrado que la retención de aminas protonadas a pH<3 puede ser indicativo de la medida de los sitios de intercambio iónico en la superficie de la sílice. A este pH los grupos silanoles (Si-OH) no están disociados y no contribuyen a la retención de aminas protonadas, pero los silanoles libres ácidos en su forma disociada (Si-O^-) si pueden interaccionar. El factor de selectividad entre el fenol y la bencilamina a pH 2.7 es indicativo de la contribución de los silanoles libres a los cambios de retención.

TEST 4. Fase Normal
La sílice virgen Syncronis es una fase estacionaria polar de excelente reproducibilidad en cromatografía de Fase Normal. Cada lote se comprueba en estas condiciones.

TEST 5. Intercambio Iónico
La fase Syncronis Amino es una fase químicamente ligada polar que ofrece una reproducibilidad excelente en condiciones de Fase Normal. Cada lote se comprueba en condiciones de intercambio iónico.

TEST 6. Retención y Selectividad HILIC
El medio cromatográfico HILIC Syncronis es una fase estacionaria polar que permite una mejor retención de compuestos polares e hidrofílicos. Cada lote de HILIC Syncronis se comprueba bajo condiciones HILIC.

Para asegurar resultados consistentes columna tras columna, todas las columnas Syncronis se rellenan en equipos automatizados.

Para asegurar que las mediciones representan una indicación real de la calidad del empacado, el control de cada columna se efectúa en un sistema cromatográfico altamente optimizado.