Columnas ThermoFisher HyperCarb

El Carbón Poroso Grafitizado (PGC) es una fase estacionaria única formada por láminas planas de átomos de carbono dispuestos hexagonalmente con una valencia determinada, como en una molécula aromática polinuclear muy grande. HyperCarb es diferente a las fases tradicionales unidas químicamente a sílice tanto en su estructura como en sus propiedades retentivas, permitiendo una estabilidad total frente al pH y la retención y separación de moléculas altamente polares. Las columnas HyperCarb resultan ideales para solucionar problemas de separación, tanto en HPLC de Fase Normal o de Fase Reversa y es perfecta en aplicaciones LC/MS.

Retención y Resolución
El mecanismo de retención de HyperCarb es muy dependiente tanto de la polaridad como de la planaridad (forma) del soluto. Estos mecanismos específicos de interacción permiten la retención con éxito de analitos que no pueden separarse en condiciones típicas de Fase Reversa. La eliminación de tampones complejos o reactivos de par iónico, y el uso de mayores concentraciones de modificadores orgánicos para analitos polares permiten una mayor compatibilidad con técnicas de detección del tipo MS. La retención en HyperCarb resulta de la combinación de dos mecanismos:
1. Adsorción
La interacción del analito con HyperCarb depende en gran medida del área molecular en contacto con la superficie de grafito, y también del tipo y posición de los grupos funcionales en relación con la superficie de grafito en el punto de contacto.
2. Interacciones de inducción de carga con la superficie polarizable
El segundo mecanismo, dipolo de inducción de carga, explica la fuerte retención de compuestos polares. Al acercarse un compuesto polar a la superficie  se crea un dipolo de inducción, aumentando la atracción entre el analito y la superficie de grafito.. Estas cargas no han de confundirse con la carga total iónica de la molécula, como sucede en un compuesto básico ionizado en condiciones de pH ácido.  El mecanismo de inducción dipolar se debe estrictamente a la interacción de la carga electrostática de la molécula polar con la superficie del grafito.

Los fuertes mecanismos de interacción con HyperCarb permiten el uso de columnas más cortas durante el proceso de desarrollo de métodos. En la mayoría de los casos columnas de 100mm resultan más que suficientes para obtener una separación.

Mayor Retención de Analitos Polares
En la Cromatografía de Fase Reversa típica, la retención de un analito se relaciona directamente con su hidrofobicidad: a mayor hidrofobicidad mayor retención. De la misma manera a medida que la polaridad del analito aumenta, las interacciones analito-solvente empiezan a dominar y la retención disminuye. Esta observación resulta cierta para la mayoría de los sistemas de fase reversa con la excepción de HyperCarb, en la que, en algunos casos, retención puede aumentar con la polaridad del analito. Este fenómeno, ilustrado en la imagen de la derecha en la que se muestra cómo la retención aumenta al aumentar la polaridad del analito frente al caso opuesto de una fase reversa tipo PS-DVB, se denomina "efecto de retención polar en el grafito" (PREG). Esta propiedad hace que las columnas HyperCarb resulten particularmente útiles en la separación de compuestos altamente polares (con un log P tan bajo como -4) que se retienen con mucha dificultad en fases silíceas basadas en cadenas alquílicas. a retención de compuestos polares puede conseguirse en HyperCab sin condiciones de par iónico o con fases móviles complejas.

Rango de pH ampliado
Otra de las ventajas clave de Hypercarb es la extrema estabilidad de la fase al ataque físico o químico.  Debido a las características únicas del medio, puede resistir el ataque químico en todo el rango de pH de 0 a 14, permitiendo aplicaciones a pH que son incompatibles en columnas basadas en sílice.
Las columnas Hypercarb permiten una mayor selección de tampones y a mayores presiones y temperaturas.
Los ejemplos muestran la estabilidad de Hypercarb en el análisis de glucobiósidos a pH 11 con una fase móvil de NaOH y a pH 12 durante 93 días.

Separación de Compuestos Estructuralmente Relacionados
Las columnas HyperCarb puede diferenciar entre dos analitos muy relacionados como isómeros o series homólogas por dos vías: la naturaleza de su superficie y la forma espacial del analito. Mientras que en columnas C18 no hay discriminación entre grupos metilénicos y metílicos, en HyperCarb se observa un gran aumento de la resolución, tal como se muestra en la figura. La resolución de los analitos se basa en su ajuste a la superficie de grafito, y permite la separación cromatográfica de compuestos muy similares como en la separación de los diastereoisómeros del antibiótico Axetil. La columna HyperCarb ofrece tanto una mejora significativa en resolución frente a una columna C18 clásica como un cambio en el orden de elución.

Ideal para el análisis de Compuestos Polares en Fase Reversa y LC/MS
El análisis de compuestos muy polares puede ser muy difícil cuando las fases hidrofóbicas combinadas con las fases móviles adecuadas para MS no ofrecen la retención necesaria para resolver y cuantificar estos compuestos. Hypercarb supera estos inconvenientes porque:

• Retiene y separa compuestos muy polares con fases móviles "adecuadas" para MS como 0.1% de ácido fórmico o acético y bajas concentraciones de tampones volátiles como acetato o formiato de amonio.
• Puede usarse con altas concentraciones  de modificadores orgánicos en la fase móvil, que mejora la nebulización con técnicas de ionización a presión atmosférica, mejorando la sensibilidad del análisis.
• Permite columnas más cortas y menores diámetros sin comprometer la capacidad, y muchas veces con mayor sensibilidad. Loas caudales con columnas de bajo diámetro o capilares son más compatibles con las técnicas MS.
• Es estable con cualquier fase móvil y no causa sangrado porque no hay modificadores de la superficie porosa de HyperCarb

HyperCarb en HPLC de Temperatura Ultra Alta
El uso de temperaturas muy altas (hasta 200 ºC) en UHT-LC generalmente reduce la retención y tiene las siguientes ventajas:

• Mayor Velocidad. Además de reducir el factor de capacidad con la temperatura, se reduce la viscosidad de la fase móvil permitiendo el uso de mayores caudales para separaciones más rápidas, sin comprometer la eficacia o sobrepasar los límites de presión del sistema.
• Mayor Capacidad. La reducción de la viscosidad de la fase móvil a mayores temperaturas mejora la transferencia de masa del soluto entre la fase móvil y estacionaria, resultando en picos más eficientes, más estrechos y de mayor capacidad.
• Mayor Sensibilidad. Picos más estrechos mejoran la relación señal/ruido. Además en UHT-LC en combinación con detección ESI y APCI, la fase móvil llega a la fuente de iones a temperatura elevada que ayuda en los procesos de evaporación y desolvatación, aumentando la eficiencia de ionización y, en consecuencia, la sensibilidad analítica.

La temperatura puede también afectar la selectividad. Este efecto puede ser pequeño en especies neutras, pero más significativo en compuestos ionizados, puesto que el pH de la fase móvil y el pKa del soluto pueden cambiar con la temperatura.

Estabilidad a Alta Temperatura
UHT-LC requiere unas determinadas especificaciones en términos de estabilidad de la columna. as columnas con fases basadas en sílice, las más usuales en HPLC de fase reversa, no deberían usarse por encima de los 60-80 ºC. A estas temperaturas extremas, pueden suceder tanto la hidrólisis del enlace organosilánico como de la sílice. HyperCarb es la fase estacionaria ideal para UHT-LC, puesto que no resulta afectada por la degradación térmica o física a alta temperatura ni por la fase móvil usada. Además en UHT-LC/MS no hay sangrado de fase. En esta aplicación ha de evitarse partes en PEEK que no son estables por encima de 120ºC. Para evitar fugas en la columna, es importante que todos los componentes sean de acero inoxidable, tal como se muestra más adelante en la lista de la columnas disponibles

Tipo

HPLC Columns for the Retention of Very Polar Molecules
The requirement to retain and analyze polar molecules by HPLC is one that has grown steadily over the last few years, and has been the driving force behind the generation of a range of new stationary phases dedicated to this purpose. The new packings offer an alternative mechanism of interaction that takes place in addition to dispersive interactions generally associated with the more tradition alkyl silane type packings. Such interactions allow for increased retention and improved peak shape of analytes with polar functionality whether basic or acid in nature. Such packings are not only targeted at the separation of polar analytes but often encompass the application range of the traditional alkyl C18 packings also.

A Unique HPLC Column Ideal for the Retention of Polar Compounds
In this short report we focus on how the unique properties of Hypercarb columns have been used to retain both polar compounds and relatively non polar compounds in the same analysis. We will also demonstrate the retention and separation of very polar compounds, which typically cannot be achieved using traditional reversed phase methods.

Method development strategy for Hypercarb
Hypercarb is a unique stationary phase for high performance liquid chromatography, with properties diverse from traditional silica gel stationary phases. Having a non-derivatised porous graphitic carbon surface, free from functional groups, means that unique retention and separation of polar compounds as well as geometric isomers can be achieved. We discuss a ‘new generic’ approach which comprises the starting conditions for obtaining a separation on Hypercarb, as well as discussing new applications.

• Disponible en 3, 5 y 7 mm
• Columnas desde 1.0 mm   hasta 4.6 mm de Diámetro Interior
• Conexión Estándar

Código de Fase 350

350YY-LLDD30

35003-104630

03=30mm 05=50mm, 10=100mm  15=150mm

03 para 3mm 05 para 5mm
07 para 7mm

10=1.0 mm 21=2.1 mm 30=3.0 mm 46=4.6 mm

Precolumnas y Soportes AQUÍ

• Disponible en 5 mm
• Columnas desde 75 mm  hasta 500 mm de Diámetro Interior
• Conexión Estándar

Código de Fase 350

350YY-LLDD65

35005-100365

Columna HyperCarb KAPPA, 5 mm, 100x0.32mm

05=50mm, 10=100mm

05 para 5mm

00=75mm 01=100mmm 02=180mm 03=320mm 05=500mm

• Disponible sólo en 5 mm
• Columnas de 10 y 50 mm
• 75 y 150 mm I.D
• Conexión Especial

Código de Fase 350

35005-011563

LL Define la Longitud

YY Define la Partícula

DD Define el diámetro

Columna HyperCarb IntegraFrit, 5 mm, 10x0.100mm

01=10mm, 05=50mm

05 para 5mm

75=75mm 15=100mmm

35005-057581

(*) IntegraFrit en multipack de 4x10mm o 3x50mm código final 64

Columna HyperCarb PicoFrit, 5 mm, 50x0.075mm

• Disponible en 5 mm
• Columnas de 20 mm y 2.1 mm DI (DASH) y 1.0, 2.1 o 4.0 mm DI (JAVELIN)
• Conexión Estándar

Código de Fase 350

350YY-02DDPN

35005-024035

-

DD Define el diámetro

PN Define el tipo

Columna HyperCarb JAVELIN, 5 mm, 20x4.0mm, pK 3

02 sólo 20 mm

10=1.0 mm 21=2.1 mm 40=4.0 mm

51= DASH 35=Javelin

• Disponibles en 5 mm y 7 mm
• Columnas de 10 mm a 50 mm DI
• Conexión Estándar

Código de Fase 350

350YY-LLDD70

35005-109270

Columna HyperCarb PREP, 5 mm, 100x21.2mm

90=10 mm 92=21.2 mm 93=30 mm 95=50 mm

• Disponible en 3 y 5  mm
• Columnas desde 1.0 mm   hasta 4.6 mm de Diámetro Interior
• Conexión Estándar

Código de Fase 350

350YY-LLDD70

35003-052146

Columna HyperCarb HT, 3 mm, 50x2.1mm

10=1.0 mm 21=2.1 mm 30=3.0 mm 46=4.6 mm